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茶树菇多糖脱蛋白方法研究

减小字体 增大字体 作者:石莉娜 任大明 程 宇 裴 涛  来源:www.bob123.com  发布时间:最新发布
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  摘要 将传统的多糖提取方法、胰蛋白酶的“酶解-透析”作用及活性炭处理相结合去除茶树菇多糖提取液中的蛋白质。结果表明:蛋白质去除较完全,多糖的损失率较少,同时还可去除色素、果胶和核酸等杂质。
  关键词 茶树菇多糖;脱蛋白;方法
  中图分类号 S646 文献标识码A文章编号1007-5739(2008)20-0014-01
  
  茶树菇是担子菌纲伞菌目类绣伞科的真菌微生物,是一种被人们称为“菇中珍品”的食用菌,它含有多种微量元素和人体所需要的17种氨基酸,营养价值和药用价值比其他食用菌高出数倍以上。茶树菇多糖的药理作用很广泛,主要表现为可提高机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、抑制流感病毒、抗感染以及对化学物质所致肝损伤有保护作用等。
  有关茶树菇多糖分离纯化的报道并不多见。在分离阶段大多都采用多次有机试剂沉淀法来去除其中的蛋白质,但是这种方法存在一次性除蛋白质效率低、多糖损失率高、有机相不易分离、污染较大等缺点。笔者通过试验,获得一种去除茶树菇多糖中蛋白质的新方法,其一次除蛋白质效率高,操作简单,废液易回收。
  
  1 材料与方法
  
  1.1材料与试剂
  茶树菇干品,购于辽宁省沈阳市超市;胰蛋白酶(北京奥博星生物技术责任有限公司产品);95%乙醇、无水乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇、活性炭均为分析纯。
  1.2试验仪器
  721-A可见分光光度仪;国华-数显恒温水浴锅;LGR10-4.2高速冷冻离心机;LGJ-10冷冻干燥机;pHS-25 pH计;Nicolet Evolution300紫外-可见分光光度仪。
  1.3工艺流程
  茶树菇干品→粉末(过60目)→热水浸提→离心取上清液→脱除蛋白→95%乙醇沉淀→丙酮、无水乙醇冲洗→回收多糖→冷冻干燥→茶树菇粗多糖。
  1.4茶树菇提取液脱蛋白
  茶树菇提取液先用Sevage试剂(氯仿∶正丁醇为4∶1)除蛋白1次,离心透析48h,按一定比例加入胰蛋白酶溶液进行酶解,2h后透析,最后用活性炭处理,离心得到脱蛋白液。
  1.5分析方法
  牛血清蛋白测定蛋白含量;紫外吸收法定性分析。
  
  2结果与分析
  
  2.1茶树菇多糖提取液脱蛋白效果
  由表1可知,通过常用的脱蛋白方法,即反复多次使用“Sevage试剂透析”除蛋白,蛋白质去除率较高,但多糖损失率也较高,且该方法大量使用有机试剂,有机相与多糖不易分离,需要透析时间较长,污染较大。而使用本试验创新的脱蛋白方法,Sevage试剂一次除蛋白效率达到88%以上,残留的蛋白质主要为以糖肽键结合的糖蛋白复合物,经过酶解处理,部分糖肽键断开,脱落的蛋白质再被分解为小分子物质,经过透析去除。剩余结合紧密的糖蛋白复合物经过活性炭处理后被去除干净。检测提取液蛋白质去除较完全,多糖损失率较低。由此说明,该方法能快速、有效地去除茶树菇多糖中的蛋白质。
  2.2紫外吸收光谱
  经过Sevage试剂、胰蛋白酶的“酶解-透析”作用及活性炭处理的茶树菇多糖溶液在190~300nm下进行紫外扫描,观察其紫外吸收如图1所示。
  由图1可知,经过处理后的多糖溶液样品,在波长260 nm和280nm处无吸收峰,说明样品中的核酸和蛋白质基本去除干净。200nm附近的强吸收峰与之前紫外扫描的未脱除蛋白的茶树菇多糖样品的强吸收峰一致,是茶树菇多糖的特征吸收峰,这与文献报道一致。
  
  3结论
  
  通过试验获得一种新的茶树菇多糖提取液脱蛋白质方法,其能够快速去除茶树菇多糖中的蛋白质,具有脱蛋白效率高、操作简单、多糖损失小等特点;该法还能有效地去除茶树菇多糖中的其他杂质,如色素、核酸等大分子物质。
  
  4参考文献
  
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